С 1240-х по 1485 год Тверь была политическим, экономическим и культурным центром крупного самостоятельного княжества. После победы Москвы над Тверью за роль объединяющего Русь центра летописи и многие другие тверские древности были уничтожены.

Древнейшей из сохранившихся тверских икон считается икона начала XIV века «Святые Борис и Глеб» из Савво-Вишерского монастыря. Коричневые, красные, синие краски, использованные при написании фигур, и серебряный фон с белыми нимбами являются отсылкой к киевской системе колорита. Сочетание светлого фона и насыщенных цветом фигур создавало объем, этот прием неоднократно использовался местными мастерами в других, более поздних работах. В образе святых братьев присутствуют также черты новгородского и ростово-суздальского влияний (например, в орнаменте одежд и активном использовании пробелов в личном письме). Непосредственно тверской традицией можно назвать то, что пробела здесь использовались гораздо активнее, чем в других школах, в иконе Бориса и Глеба они лучами отходят от уголков глаз, ложатся на нос, брови, подбородок, шею. Крупные фигуры, статичная композиция, тяжелый и плотный колорит, лики экспрессивны, лишены тонкости – все эти черты можно перенести и на остальную живопись тверской школы этого периода. В будущем, за счет укрупнения масштабов личного письма, будет подчеркиваться значимость и выразительность жестов, что прослеживается на примере иконы «Спас Вседержитель» первой половины XIV века.

В иконах XIV века большее внимание уделяется линеарности, сохраняется пластичность и все та же плотная колористическая система, заимствованная из киевских образов. Согласно летописям этого времени, в Тверь приезжали послы из Константинополя, равно как и местные послы посещали столицу Византии. Но тверичи не переняли черты палеологовского искусства и остались верны своим архаическим идеалам, в противовес московским нововведениям.

В XV веке иконописные традиции Твери окончательно сложились. Мастера уже более уверенно владеют холодным, мерцающим колоритом фона, объемностью фигур, усиливается движение в сторону декоративности. Во многих образах появляется синий и бирюзовый, контрастирующие с киноварью, зеленым и желтым цветами. Во всех образах присутствуют такие объединяющие их черты, как разреженность композиций, прозрачные слои краски, прерывающиеся волнистые линии и неустанный бирюзовый цвет. В это время уже чувствуется большое влияние московской традиции, растворение в ней, превращение местной, самостоятельной школы в провинциальную.